Nuove indagini di controllo qualità sui vaccini: micro e nanocontaminazione
Antonietta M Gatti,1,2 Stefano Montanari3
1Consiglio Nazionale delle Ricerche, Istituto per la Scienza e la Tecnologia della Ceramica, Italia
2Istituto internazionale per l'acqua pulita, USA
3Nanodiagnostics srl, Italia
Corrispondenza: Dott.ssa Antonietta Gatti, Consiglio Nazionale delle Ricerche, c/o Nanodiagnostics Via E. Fermi, 1/L, 41057 San Vito (MO), Italia, Tel 059798778
Ricevuto: novembre 30, 2016 | Edito: Gennaio 23, 2017
Citazione: Gatti AM, Montanari S (2016) Nuove indagini di controllo di qualità sui vaccini: micro e nanocontaminazione. Int J Vaccini Vaccin 4(1): 00072. DOI: 10.15406/ijvv.2017.04.00072
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Astratto
I vaccini sono sotto indagine per i possibili effetti collaterali che possono causare. Al fine di fornire nuove informazioni, allo studio dei vaccini è stato applicato un metodo di indagine al microscopio elettronico, finalizzato alla verifica della presenza di contaminanti solidi mediante un microscopio elettronico a scansione ambientale dotato di una microsonda a raggi X. I risultati di questa nuova indagine mostrano la presenza di micro e nano particelle composte da elementi inorganici nei campioni dei vaccini che non è dichiarata tra i componenti e la cui presenza indebita è, per il momento, inspiegabile. Una parte considerevole di questi contaminanti particolati è già stata verificata in altre matrici e riportata in letteratura come non biodegradabile e non biocompatibile. Le evidenze raccolte sono indicative di alcune ipotesi correlate a malattie che vengono menzionate e brevemente discusse.
Parole chiave: vaccino, malattia, contaminazione, corona proteica, biocompatibilità, tossicità, nanoparticelle, immunogenicità, corpo estraneo, ambiente, processo industriale, controllo qualità
Introduzione
I vaccini sono una delle invenzioni più importanti destinate a proteggere le persone dalle malattie infettive. La pratica della variolazione è secolare ed è menzionata in documenti cinesi e indiani datati intorno al 1000 d.C. Nel corso del tempo, la variolazione è stata sostituita dalla vaccinazione, i vaccini sono stati migliorati dal punto di vista tecnologico e la pratica della vaccinazione è ora standardizzata in tutto il mondo.
Gli effetti collaterali sono sempre stati segnalati ma negli ultimi anni sembra che siano aumentati in numero e gravità, in particolare nei bambini come riporta l'American Academy of pediatrics.1,2 Ad esempio, il vaccino difterite-tetano-pertosse (DTaP) è stato collegato a casi di sindrome della morte improvvisa del lattante (SIDS);3 vaccino contro morbillo-parotite-rosolia con autismo;4,5 vaccinazioni multiple con disturbi immunitari;6 vaccini contro l'epatite B con sclerosi multipla, ecc.
L'avviso di Tripedia DTaP di Sanofi Pasteur riporta "Gli eventi avversi segnalati durante l'uso post-approvazione del vaccino Tripedia includono porpora trombocitopenica idiopatica, SIDS, reazione anafilattica, cellulite, autismo, convulsioni/convulsioni di grande male, encefalopatia, ipotonia, neuropatia, sonnolenza e apnea". Gli studi epidemiologici effettuati non hanno mostrato una chiara evidenza di tali associazioni, anche se nel 2011 l'Accademia Nazionale di Medicina (ex IOM) ha ammesso: "I vaccini non sono esenti da effetti collaterali, o effetti avversi".7
Ricerche specifiche su componenti dei vaccini come gli adiuvanti (nella maggior parte dei casi, i sali di alluminio) sono già indicate come possibili responsabili di sintomi neurologici8\u201210 e in alcuni casi, test in vivo e studi epidemiologici hanno dimostrato una possibile correlazione con malattie neurologiche.ore 10,11 I danni neurologici indotti in pazienti in emodialisi trattati con acqua contenente alluminio sono riportati in letteratura.12
Recentemente, con i vaccini adottati in tutto il mondo contro il Papillomavirus Umano (HPV), il dibattito si è riacceso a causa di alcuni effetti avversi segnalati da alcuni giovani soggetti.
Studi specifici hanno comunicato l'esistenza di sintomi legati a sindromi mai descritte prima, sviluppatesi dopo la somministrazione del vaccino. Ad esempio, la sindrome del dolore regionale complesso (CRPS), la sindrome da tachicardia posturale ortostatica (POTS) e la sindrome da stanchezza cronica (CFS).13 Gli effetti collaterali che possono insorgere in un tempo relativamente breve possono essere locali o sistemici.
Vengono descritti dolore nel sito di iniezione, gonfiore e movimento incontrollabile delle mani (sebbene anche quest'ultimo sintomo possa essere considerato sistemico). Tra gli effetti sistemici si segnalano febbre, cefalea, irritabilità, crisi epilettiche, perdita temporanea del linguaggio, disestesia e paresi degli arti inferiori, vampate di calore, disturbi del sonno, reazioni di ipersensibilità, dolori muscolari, sincope ricorrenti, fame costante, significativa compromissione della deambulazione, incapacità di mantenere la postura ortostatica.14
E' un dato di fatto che ogni giorno vengono somministrate milioni di dosi di vaccino e non succede nulla di notevole, ma è anche inconfutabile che, a prescindere dalla quantità di effetti collaterali che non si registrano e la cui percentuale rimane di fatto sconosciuta, in un numero limitato di casi accade qualcosa che non va. Non è stata fornita alcuna spiegazione soddisfacente o, in molti casi, non è stata fornita alcuna spiegazione e sembra che tali effetti negativi si verifichino su base casuale e stocastica.
Queste situazioni ci hanno indotto a verificare la sicurezza dei vaccini da un punto di vista che non era mai stato adottato prima: non un approccio biologico, ma fisico. Così, abbiamo sviluppato un nuovo metodo di analisi basato sull'uso di un microscopio elettronico a scansione ambientale con pistola a emissione di campo per rilevare possibili contaminazioni fisiche in quei prodotti.
Materiali e metodi
Sono stati analizzati 44 tipi di vaccini provenienti da 2 paesi (Italia e Francia). La tabella 1 li raggruppa in termini di nome, marchio e scopo.
N
Nome
Marca, paese di distribuzione
Descrizione
Lotto di produzione, data di scadenza
1
Vivotif Berna
Berna Biotech SA, Italia
Vaccino anti-tifoide (Live), gruppo Ty21a
3000336 [2004]
2
Typhim Vi
Aventis Pasteur MSD, Italia
Vaccino anti-Salmonella typhi
U1510-2 [2004]
3
Typherix
GlaxoSmithKline S.p.a., Italia
Vaccino anti-tipoide (polisaccaride Vi)
ATYPB061BB [2009]
4
Anatetall
Chiron (ora Novartis) Italia
Vaccino antitetanico adsorbito
030106 [2004]
5
Anatetall
Novartis Vaccines and Diagnostics, Italia
Vaccino antitetanico adsorbito
060510 [2009]
6
Tetabulina
Baxter AG, Italia
Vaccino antitetanico adsorbito
VNG2G006A [2009]
7
Dif-Tet-All
Novartis Vaccines and Diagnostics, Italia
Vaccino anti-tetanico e difterico adsorbito
070501 [2009]
8
Infanrix
GlaxoSmithKline S.p.a., Italia
Vaccino antidifterite, tetano e pertosse
AC14B071AJ [2009]
9
Infanrix hexa
GlaxoSmithKline Biologicals s, Italia
Antidifterite, tetano, pertosse, epatite B, poliomielite
e malattia da Haemophilus influenzae di tipo b
A21CC512A [ 2017]
10
Infanrix hexa
GlaxoSmithKline Biologicals s. a. Francia
Antidifterite, tetano, pertosse, epatite B, poliomielite
e malattia da Haemophilus influenzae di tipo b
A21CC421A [ 2017]
11
M-M-R vaxPro
Sanofi Pasteur MSD, Italia
M-M-R vaxPro (morbillo, parotite e rosolia)
analizzato a Cambridge
L012437 [ 2017]
12
Repevax
Sanofi Pasteur MSD, Francia
Vaccino anti-difterite-tetano-pertosse-poliomielite
L0362-1 [2017]
13
Repevax
Sanofi Pasteur MSD SNC Francia
Vaccino anti-difterite-tetano-pertosse-poliomielite
L0033-1 [2016]
14
Priorix
GlaxoSmithKline S.p.a., Italia
Vaccino contro morbillo-parotite e rosolia (MPR)
A69CB550A [2009]
15
Morupar
Chiron (ora Novartis, ), Italia
Vaccino anti-morbillo-parotite e rosolia (MPR)
7601 [2004]
16
Varilrix
GlaxoSmithKline S.p.a., Italia
Vaccino anti-varicella (gruppo OKA)
A70CA567A [2009]
17
Stamaril Pasteur
Sanofi Pasteur MSD, Italia
Vaccino anti-febbre gialla
A5329-6 [2009]
18
Allergoide-Adsorbat 6-Graser Starke B.
Allergopharma, Germania
Vaccino antiallergico
Ch-B.:30005999-B [2006]
19
Engerix-B
GlaxoSmithKline S.p.a., Italia
Vaccino adsorbito anti-epatite B
AHBVB468BD [2009]
20
Prenevar 13
Pfizer, Italia
Vaccino antipneumococcico
G79324 [2013]
21
Prevenar 13
Pfizer, Francia
Vaccino antipneumococcico
N27430 [ 2018]
22
Mencevax Acwy
GlaxoSmithKline, Italia
vaccino anti-Neisseria meningococco di gruppo A, C, W135 e Y
N402A47B 12 [2004]
23
Meningitec
Pfizer, Italia
(gruppo C 10) (adsorbito su Al-fosfato)
H92709 [2015]
24
Meningitec
Pfizer-Italia
Vaccino anti-meningococco (gruppo C 10) (adsorbito su Al-fosfato)
H20500 [2014]
25
Meningitec
Pfizer-Italia
Vaccino anti-meningococco sequestrato dalla Procura della Repubblica
G76673 [2014]
26
Meningitec
Pfizer-Italia
Vaccino anti-meningococco sequestrato dalla Procura della Repubblica
H99459 [2015]
27
Meningitec
Pfizer-Italia
Vaccino anti-meningococco sequestrato dalla Procura della Repubblica
H52269 [2015]
28
Menjugate (Menjugate)
Vaccini e diagnostica Novartis
Anti-meningococco gruppo C
YA0163AB [2010]
29
Menveo
Vaccini e diagnostica Novartis
Antimeningococco gruppi A, C, W135, Y
A15083 [2017]
30
Meningitec
Wyeth Pharmaceutical - Francia
Vaccino anti-meningococco di gruppo C
E83920 [2011]
31
Inflexal V
Berna Biotech
Vaccino antinfluenzale 2008/2009
3001463-01 [2009]
32
Vaxigrip
Sanofi Pasteur MSD
Vaccino antinfluenzale 2008/2009
D9703-1 [2009]
33
Vaxigrip
Sanofi Pasteur
Vaccino antinfluenzale 2012/2013
J8401-1 [2013]
34
Vaxigrip
Sanofi Pasteur, Italia
Vaccino antinfluenzale, con virus inattivato e scisso
M7319-1 [2016]
35
Focetria
Vaccini e diagnostica Novartis
Vaccino antinfluenzale pandemico H1N1
0902401 [2010]
36
Agrippal
Novartis
Vaccino antinfluenzale 2012/2013
127002A [2013]
37
Agrippal
Vaccini Novartis, Italia
Vaccino antinfluenzale a virus inattivato e split 2015/2016 -
152803 [2016]
38
Agrippal S1
Vaccini e diagnostica Novartis
Anti-influenzale inattivato/antigene superficiale v - 2014/2015
147302A [2015]
39
Fluarix
GlaxoSmithKline - GSK
Vaccino antinfluenzale 2013
AFLUA789AA [L'uomo che non c'è]
40
Fluad
Vaccini e diagnostica Novartis
Vaccino antinfluenzale inattivato/antigenico superficiale - 2014/2015
142502 [2015]
41
Gardasil
Sanofi Pasteur MSD, Italia
Vaccino anti-HPV tipi 6,11,16,18
NP01250 [2012]
42
Gardasil
Sanofi Pasteur MSD, Italia
Vaccino anti-HPV (tipi 6,11,16,18)
K023804 [2016]
43
Cervarix
GlaxoSmithKline Biological, Italia
Anti-HPV (tipo 16,18)
AHPVA238AX [2017]
44
Feligen CRP
Virbac S.A. - Carros - Italia
anti-panleucopenia, rinotracheite infettiva e infezioni
da Calcivirus, vaccino veterinario per gatti
3R4R [2013]
Tabella 1 Elenco dei vaccini analizzati, in base al loro scopo
Alcuni vaccini, di fatto una minoranza, sono destinati a trattare un singolo batterio o virus, mentre altri sono polivalenti. L'elenco dei vaccini che abbiamo analizzato può contenere nomi ripetuti, perché abbiamo considerato lotti e anni diversi di produzione dello stesso vaccino: quelli contro l'influenza in particolare.
Lo studio era finalizzato a verificare una possibile contaminazione fisica. Per fare ciò, abbiamo eseguito un nuovo tipo di indagine basata su osservazioni sotto un microscopio a scansione elettronica ambientale con pistola a emissione di campo (FEG-ESEM, Quanta 200, FEI, Paesi Bassi) equipaggiato con la microsonda a raggi X di uno spettroscopio a dispersione di energia (EDS, EDAX, Mahwah, NJ, USA) per rilevare l'eventuale presenza di contaminanti inorganici e particolati e identificarne la composizione chimica.
Una goccia di circa 20 microlitri di vaccino viene rilasciata dalla siringa su un filtro in cellulosa di 25 mm di diametro (Millipore, USA), all'interno di un armadio di flusso. Il filtro viene poi depositato su un tronchetto di alluminio ricoperto da un disco di carbone adesivo. Il campione viene immediatamente inserito all'interno di una scatola pulita al fine di evitare qualsiasi contaminazione e la scatola viene riaperta solo per l'inserimento del campione all'interno della camera FEG-ESEM. Abbiamo scelto questo particolare tipo di microscopio in quanto permette di analizzare campioni acquosi e oleosi in basso vuoto (da 10 a 130 Pa) ad alta sensibilità.
Quando l'acqua e la soluzione salina contenute nel vaccino sono evaporate, i componenti biologici/fisici emergono sul filtro ed è quindi possibile osservarli. Questo tipo di microscopio (osservazioni a basso vuoto) previene la possibile contaminazione del campione e la creazione di artefatti. Le osservazioni sono effettuate con diversi sensori (SE: sensore di elettroni secondari e BSE: sensore di elettroni retrodiffusi), e vengono eseguite ad una pressione di 8,9 e-1 mbar, ad energie comprese tra 10 e 30kV per rilevare le dimensioni, la morfologia e la composizione elementare del particolato. Il metodo identifica chiaramente i corpi inorganici con una densità atomica più elevata (che sembra più bianca) rispetto al substrato biologico. Quindi, le entità organiche sono visibili e facili da distinguere da quelle inorganiche. Il metodo non è in grado di distinguere tra proteine e adiuvanti organici (es. squalene, glutammato, proteine, ecc.) o virus, batteri, DNA batterico, endotossine e rifiuti batterici, ma la loro densità atomica relativamente bassa ci permette di identificare queste entità come materia organica. In alcuni vaccini, la materia organica contiene detriti dall'aspetto bianco chiamati aggregati, mentre un'alta concentrazione di detriti inorganici è chiamata cluster.
Vengono identificate, valutate e contate singole particelle inorganiche o aggregati organici-inorganici. La procedura di conteggio viene ripetuta tre volte da tre operatori diversi, con un errore inferiore al 10%. Quando viene rilevato uno strato di sali (cloruro di sodio o alluminio), registriamo la situazione ma non facciamo il conteggio dei corpi.
Risultati
Le indagini hanno verificato la composizione fisico-chimica dei vaccini considerati in funzione della componente inorganica dichiarata dal Produttore. Nel dettaglio, è stata verificata la presenza di sali salini e di Alluminio, ma in tutti i casi è stata identificata un'ulteriore presenza di corpi estranei micro, sub-micro e nanodimensionati, inorganici (che vanno da 100nm a una decina di micron), la cui presenza non è stata dichiarata nei foglietti illustrativi consegnati nella confezione del prodotto (Tabella 2).
N
Società
Nome
Alluminio
Elementi identificati
1
Allergopharma - Germania
Allergoide
Sì
Ale
2
Aventis Pasteur MSD Lione - Francie
Typhim Vi
No
BrKP, PbSi, FeCr, PbClSiTi
3
Baxter AG
Tetabulina
No
SiMg, Fe, SiTiAl, SBa, Zn
4
Berna Biotech
Vivotif Berna
No
FeAl, ZrAlHf, SrAl, BiAlCl
5
Berna Biotech
Inflexal V
No
CuSnPbZn, Fe, CaSiAl, SiAl, NaPZn, ZnP, AlSiTi
6
Chirone
Anatetall
Al(OH)3
FeAl, SZnBaAl
7
Chirone
Morupar
No
/
8
GlaxoSmithKline- Belgio
Mencevax ACWY
No
FeCrNi, ZrAl, FeCrNiZrAlSi
9
GlaxoSmithKline
Infanrix
Al(OH)3
Al, AlTi, AlSi
10
GlaxoSmithKline Biologici
Infanrix hexa
Al(OH)3
SBa, FeCu, SiAl, FeSi, CaMgSi, AlCaSi, Ti, Au, SCa, SiAlFeSnCuCrZn, CaAlSi
11
GlaxoSmithKline Biologici
Infanrix hexa
Al(OH)3 ,AlPO4. 2H2O
W, FeCrNi, Ti
12
GlaxoSmithKline
Typherix
No
Ti, TiW, AlSiTiWCr, SBa, W, SiAl, AlSiTi
13
GlaxoSmithKline
Priorix
No
WCa, WFeCu, SiAl, SiMg, PbFe, Ti, WNiFe
14
GlaxoSmithKline
Engerix-B
No
Al (precipita)
15
GlaxoSmithKline
Varilrix
No
FeZn, FeSi, AlSiFe, SiAlTiFe, MgSi, Ti, Zr, Bi
16
GlaxoSmithKline
Fluarix
No
AlCu, Fe, AlBi, Si, SiZn, AlCuFe, SiMg, SBa, AlCuBi, FeCrNi, SPZn
17
GlaxoSmithKline Biologici
Cervarix
Al(OH)3
AlSi, FeAl, SiMg, CaSiAl, CaZn, FeAlSi, FeCr, CuSnPb
18
Vaccini e diagnostica Novartis
Anatetall
Al(OH)3
Al, FeCrNi, AlCr, AlFe, BaS, ZnAl
19
Vaccini e diagnostica Novartis
Dif-Tet-All
Al(OH)3
Fe, SBa, SiSBa, AlZnCu, AlZnFeCr
20
Vaccini e diagnostica Novartis
Kit menjugato
Al(OH)3
SiAl, Ti, FeZn, Fe, Sb, SiAlFeTi, W, Zr
21
Vaccini e diagnostica Novartis
Focetria
No
Fe, FeCrNiCu, FeCrNi, SiFeCrNi, Cr, SiAlFe, AlSiTiFe, AlSi, SiMgFe, Si, FeZn
22
Novartis
Agrippal S1
No
Ca, Fe, SBa, SBaZn, Cr, Si, Pb, Bi, e FeSiAlCr, SiAlSBaFe, CaAlSi, Zn, CeFeTiNi, FeCrNi
23
Vaccini e diagnostica Novartis
Agrippal S1
No
SiAlK, Si, SiMgFe, CaSiAl, SBaZn
24
Vaccini Novartis
Agrippal
No
Cr, Ca, SiCaAl, ZrSi, SBa, CuZn, SCa
25
Novartis Vaccini e diagnostica S
Fluad
No
CaSiAl, FeSiTi, SiMgAlFe, SBa
26
Vaccini e diagnostica Novartis
Menveo
No
CaSiAl, SiAlFe, FeCrNi, Fe, Al, SBa
27
Pfizer
Prenevar 13
No
FeCr
28
Pfizer
Prevenar 13
No
W, CaAlSi, Al, CaSiAlFe, FeS, FeCr, FeCrNi, Fe, , CaP, FeTiMn, Ba, SiMgAlFe
29
Pfizer
Meningitec - ctrl
No
Cr, Si
30
Pfizer
Meningitec - ctrl
No
FeCrNi, W
31
Pfizer
Meningitec
No
CaSiAl, CaSi, SiAlFeTi, FeCrNi, W, Fe, Pb
32
Pfizer
Meningitec
No
Cr (precipitati), Ca, AlSi
33
Pfizer
Meningitec
No
W, SiCa, CaSi, Pb, FeCrNi, Cr
34
Wyeth Pharmaceutical - Regno Unito
Meningitec
No
SiAlFe, SiAlTi, SiMgFe, W, Fe, Zr, Pb, Ca, Zn, FeCrNi
35
Sanofi Pasteur MSD-Francia
Vaxigrip
No
Fe, FeCrNi, SiAlFe, AlSi, SiAlFeCr
36
Sanofi Pasteur MSD
Stamaril Pasteur
No
CaSiAl, AlSi, Fe, SiMgFe, SiMgAlFe, CrSiFeCr, CrSiCuFe
37
Sanofi Pasteur MSD
Gardasil
AlPO4. 2H2O
AlCuFe, PbBi, Pb, Bi, Fe
38
Sanifi Pasteur MSD
Gardasil
AlPO4. 2H2O
CaAlSi, AlSi, SiMgFe, Al, Fe, AlCuFe, FeSiAl, BiBaS, Ti, TiAlSi
39
Sanofi Pasteur
Vaxigrip
No
Ca, CrFe, FeCrNi, CaSZn, CaSiAlTiFe, Ag, Fe
40
Sanofi Pasteur
Vaxigrip
No
SiMgFe, CaSiAl, AlSiFe, AlSi, FeCr, FeZn, Fe
41
Sanofi Pasteur MSD
Repevax
AlPO4 .2H2O
Bi, Fe, AlSiFe, SiMg, SBa, Ca
42
Sanofi Pasteur MSD S
Repevax
AlPO4.2H2O
Ti, Br, AuCuZn, Ca, SiZn, SiAuAgCu, SiMgFe, FeCrNi.AlSiMgTiMnCrFe, SiFeCrNi, FeAl
43
Sanofi Pasteur MSD
M-M-R vaxPro
No
Si, SiFeCrNi, FeCrNi, FeNi, Fe, SCa, AlSiCa, CaAlSiFeV, SBa, Pt, PtAgBiFeCr
44
Virbac S.A. - Carros - Francia
Feligen CRP
No
Ca,SiAl
Tabella 2 Elenco dei vaccini in base ai loro produttori con la composizione chimica dei detriti identificati in ciascun campione. Si riportano gli elementi più rappresentati
Riproduci il video
La Figura 1a mostra uno strato di cristalli di cloruro di sodio (NaCl) che incorporano sali di fosfato di alluminio (AlPO4) in una goccia di Gardasil (vaccino anti-HPV di Merck) come mostra lo spettro EDS (Figura 1b). La soluzione salina è la base fluida di qualsiasi preparazione di vaccini e i sali di alluminio o l'idrossido di alluminio Al(OH)3 sono gli adiuvanti che vengono solitamente aggiunti.
Osservando l'area al di fuori di questi precipitati ma all'interno della goccia liquida, abbiamo identificato altre cose: singole particelle, ammassi di particelle e aggregati (composti organico-inorganici) che sono dovuti ad un'interazione del particolato inorganico con la parte organica del vaccino.
La figura 2a-2f mostra la diversa tipologia di entità identificate nei vaccini (Repevax, Prevenar e Gardasil); singole particelle, cluster di micro e nanoparticelle (<100nm) e aggregati con i loro spettri EDS (Figura 2d-2f). Le immagini (Figura 2a e 2d) mostrano detriti di alluminio, silicio, magnesio e titanio; di particelle di ferro, cromo, silicio e calcio (Figure 2b e 2e) disposte in un cluster, e detriti di alluminio-rame (figure 2c e 2f) in un aggregato.
Come si può vedere, le particelle sono circondate e incorporate in un substrato biologico. In tutti i campioni analizzati, abbiamo identificato particelle contenenti: Piombo (Typhym, Cervarix, Agrippal S1, Meningitec, Gardasil) o acciaio inossidabile (Mencevax, Infarix Hexa, Cervarix. Anatetall, Focetria, Agrippal S1, Menveo, Prevenar 13, Meningitec, Vaxigrip, Stamaril Pasteur, Repevax e MMRvaxPro).
La Figura 3a-3d mostra le particelle di Tungsteno identificate nelle gocce di Prevenar e Infarix (Alluminio, Tungsteno, Cloruro di Calcio).
Figura 3 Immagini di particelle di tungsteno identificate in gocce di Prevenar e Infarix. Sono composti rispettivamente da Tungsteno, Alluminio, Ferro ma in concentrazioni diverse. Le frecce mostrano i punti in cui sono stati presi gli spettri EDS.
Le Figure 4a-4d presentano detriti singolari trovati in Repevax (silicio, oro, argento) e Gardasil (zirconio).
Sono state identificate anche alcune particelle metalliche in tungsteno o acciaio inossidabile. Altre particelle contenenti Zirconio, Afnio, Stronzio e Alluminio (Vivotif, Meningetec); Tungsteno, Nichel, Ferro (Priorix, Meningetec); Antimonio (kit menjugato); Cromo (Meningetec); Sono stati trovati anche oro o oro, zinco (Infarix Hexa, Repevax), o platino, argento, bismuto, ferro, cromo (MMRvaxPro) o piombo, bismuto (Gardasil) o cerio (Agrippal S1). Il solo Tungsteno compare in 8/44 vaccini, mentre il Cromo (da solo o in lega con Ferro e Nichel) in 25/44. Le indagini hanno rivelato che alcune particelle sono incorporate in un substrato biologico, probabilmente proteine, endotossine e residui di batteri. Non appena una particella entra in contatto con fluidi proteici, si verifica una nano-bio-interazione6 si verifica e si forma una "corona proteica".7\u201210 La nano-bio-interazione genera un composto di dimensioni maggiori che non è biodegradabile e può indurre effetti avversi, poiché non è riconosciuto come sé dall'organismo.
Le figure 5a-5f mostrano esempi di queste nano-bio-interazioni. Si possono vedere aggregati (entità composite stabili) contenenti particelle di piombo in Meningitec, (Figure 5a e 5b) di acciaio inossidabile (ferro, cromo e nichel, figure 5c e 5d) e di rame, zinco e piombo in Cervarix (figure 5e e 5f). Aggregati simili, anche se in situazioni diverse (pazienti affetti da leucemia o crioglobulinemia), sono già stati descritti in letteratura.
Il legame tra queste due entità genera un dispiegamento delle proteine che possono indurre un effetto autoimmune una volta che quelle proteine vengono iniettate negli esseri umani.
Le figure 6a e 6b mostrano uno dei corpi estranei identificati in Agrippal. La particella è composta da Cerio, Ferro, Titanio e Nichel. (Figura 7a e 7b) presentano un'area di Repevax in cui è ben visibile la morfologia dei globuli rossi - non possiamo dire se siano umani o animali.
Figura 6 Mostra un aggregato organico contenente un detrito fatto di Cerio, Ferro, Nichel, Titanio. La freccia rossa indica lo strato organico (meno atomicamente denso) che ricopre la particella di Cerio.
La Tabella 3 riassume il numero e la morfologia dei detriti identificati, in termini di singole particelle, cluster di particelle o aggregati (composti organici-inorganici), mentre la Figura 8 mostra il grafico ottenuto calcolando il numero totale di particelle (particelle più cluster più aggregati) identificate per 20microl di ogni vaccino.
Nome
Totale Detriti n.
Intervallo di dimensioni in mm
Cluster n.
Intervallo di dimensioni in mm
Aggregato n. (Gamma di particelle)
Gamma dimensionale mm
Allergoide
NaCl precipita
/
/
/
/
/
Typhim Vi
394
0,1-2,5
3[9-350]
35 febbraio
Tetabulina
519
0,1-15
3[100-180]
25-60
Vivotif Berna
4
1,5-15
Inflexal V
103
0,1-17
1
20
3[35-45]
25-ott
Anatetall
2
3-gennaio
Morupar
/
/
/
Mencevax ACWY
13
0,2-5
Infanrix
3
5-gennaio
1
25
Infanrix hexa
1821
0,1-15
15[1820]
20-140
Infanrix hexa
162
0,3-7
12
60
2[7 detriti]
3.5-44
Typherix
8
0,2-8
1
15
Priorix
641
0,05-30
1
10
3[600]
20-70
Engerix-B
Precipitati
/
Varilrix
2723
0,1-4
36 [120-2000]
15-40
Fluarix
1317
0,1-40
3[83]
30-lug
Cervarix
1569
0,2-3
2
10-maggio
4[1400]
30-agosto
Anatetall
47
0,05-40
Dif-Tet-All
111
0,2-3
Menjugate (Menjugate)
73
0,1-5
Focetria
35
0,7-10
Agrippal S1
430
0,2-6
13
0.2-80
5[410]
20
Agrippal S1
1029
0,1-12
9[1025]
35-80
Agrippal
480
0,1-6
11[ 460]
Febbraio-80
Fluad
605
0,2-15
4
25-dic
6[ 600]
70
Menveo
452
0,1-13
4[430 ]
30-110
Prenevar 13
precipitati + 5 detriti
7-gennaio
Prevenar 13
precipitati + 81 detriti
0,2-50
3
Maggio-40
1 [60]
25
Meningitec
3
20-ott
Meningitec
24
Agosto-60
Meningitec
673
0,1-20
1
7
9[624]
5-110
Meningitec
precipitati + 40
0,1-3,5
2[40]
25-70
Meningitec
177
0,2-10
3[165]
15-100
Meningitec
241
0,1-15
1
50
2[230]
50
Vaxigrip
86
0,1-7
2[50]
2-2,5
Stamaril Pasteur
152
0,1-7
2
7-maggio
3[145]
20-aprile
Gardasil
304
0,05-3
1[300]
15
Gardasil
454
0.1-30
2
20-lug
9[445]
Maggio-60
Vaxigrip
304
0,1-10
1
13
2[300]
35
Vaxigrip
674
0,3-25
2
12-febbraio
10[660]
9-150
Repevax
137
0,1-20
2[130]
40-50
Repevax
214
0,1-10
6[150]
30-maggio
M-M-R vaxPro
93
0,1-15
2[50]
15-ott
Feligen CRP
92
0,1-12
1
12
1 (40 detriti)
25
Tabella 3 Elenco del numero di detriti identificati in ciascun vaccino come singola particella, cluster e aggregati.
La caratterizzazione viene effettuata in base alla forma, all'intervallo dimensionale e alla variabilità del numero di particelle contate in ciascun aggregato [tra parentesi]
Aggregati simili erano già stati descritti da altri scienziati che li avevano identificati nel sangue, ad esempio nei pazienti leucemici15 e nei soggetti affetti da crioglobulinemia.16
Non tutti i vaccini analizzati contengono la stessa contaminazione, anche se lo stesso vaccino appartenente a lotti diversi e, in alcuni casi, proveniente da paesi diversi può contenere una contaminazione simile (ad esempio i vaccini di Glaxo Infarix, Typherix e Priorix contengono Tungsteno. Il tungsteno è stato identificato anche nel kit Menjugate di Novartis e Prevenar, Meningitec di Pfizer e Meningitec di Wyeth).
Feligen, l'unico vaccino veterinario testato, è risultato essere l'unico campione esente da contaminazioni inorganiche, mentre Allergoid genera uno strato di sali inorganici così spesso da non permettere di rilevare altri contaminanti particolati.
Discussione
La quantità di corpi estranei rilevati e, in alcuni casi, la loro insolita composizione chimica ci hanno sconcertato. Le particelle inorganiche identificate non sono né biocompatibili né biodegradabili, cioè sono biopersistenti e possono indurre effetti che possono diventare evidenti sia immediatamente in prossimità del momento di iniezione che dopo un certo tempo dalla somministrazione. È importante ricordare che le particelle (cristalli e non molecole) sono corpi estranei all'organismo e si comportano come tali. Più in particolare, la loro tossicità è per certi aspetti diversa da quella degli elementi chimici che li compongono, sommandosi a quella tossicità che, comunque, è ancora presente, quella tipica dei corpi estranei. Per questo motivo, inducono una reazione infiammatoria.
Dopo essere state iniettate, queste microparticelle, nanoparticelle e aggregati possono rimanere intorno al sito di iniezione formando gonfiori e granulomi.17 Ma possono anche essere trasportati dalla circolazione sanguigna, sfuggendo a qualsiasi tentativo di indovinare quale sarà la loro destinazione finale. Riteniamo che in molti casi si distribuiscano in tutto il corpo senza provocare alcuna reazione visibile, ma è anche probabile che, in alcune circostanze, raggiungano qualche organo, nessuno escluso e compreso il microbiota, in discreta quantità. Come accade con tutti i corpi estranei, in particolare quelli piccoli, inducono una reazione infiammatoria cronica perché la maggior parte di quelle particelle non può essere degradata. Inoltre, l'effetto proteina-corona (dovuto ad una nano-bio-interazione18 può produrre particelle composite organiche/inorganiche in grado di stimolare il sistema immunitario in modo indesiderato.19\u201222 È impossibile non aggiungere che particelle delle dimensioni spesso osservate nei vaccini possono entrare nei nuclei cellulari e interagire con il DNA.23
In alcuni casi, ad esempio come accade con il ferro e alcune leghe di ferro, possono corrodersi e i prodotti di corrosione esercitano una tossicità che colpisce i tessuti.24\u201226
La rilevazione della presenza di sali di Alluminio e NaCl è ovvia in quanto si tratta di sostanze utilizzate dai Produttori e dichiarate come componenti, ma altri materiali non dovrebbero essere presenti nel vaccino o in qualsiasi altro farmaco iniettabile, e, in ogni caso, l'Alluminio è già stato collegato a malattie neurologiche.27\u201229
Date le contaminazioni che abbiamo osservato in tutti i campioni di vaccini per uso umano, gli effetti avversi dopo l'iniezione di tali vaccini sono possibili e credibili e hanno il carattere di casualità, poiché dipendono da dove i contaminanti sono trasportati dalla circolazione sanguigna. È ovvio che quantità simili di questi corpi estranei possono avere un impatto più grave su organismi molto piccoli come quelli dei bambini. La loro presenza nei muscoli, a causa di uno stravaso dal sangue, potrebbe compromettere pesantemente la funzionalità muscolare.Ore 30,31
Ci imbattiamo in particelle con composizioni chimiche, simili a quelle che si trovano nei vaccini che abbiamo analizzato, quando studiamo casi di contaminazione ambientale causati da diverse fonti di inquinamento. Nella maggior parte dei casi, le combinazioni rilevate sono molto strane in quanto non hanno alcuna utilità tecnica, non possono essere trovate in nessun manuale dei materiali e sembrano il risultato della formazione casuale che si verifica, ad esempio, quando i rifiuti vengono bruciati. In ogni caso, qualunque sia la loro origine, non dovrebbero essere presenti in nessun farmaco iniettabile, tanto meno nei vaccini, in particolare in quelli destinati ai neonati.
Altre forme di contaminazioni finora sconosciute sono state osservate di recente e, in ogni caso, i vaccini contengono componenti che potrebbero essere essi stessi causa di effetti avversi. È un fatto ben noto in tossicologia che i contaminanti esercitano un effetto reciproco e sinergico e, all'aumentare del numero di contaminanti, gli effetti diventano sempre meno prevedibili. Tanto più quando alcune sostanze sono sconosciute.
Non esistono, infatti, dati ufficiali esaustivi e attendibili sugli effetti collaterali indotti dai vaccini. Le prove episodiche riportate da persone presumibilmente danneggiate dai vaccini sono duplici: alcuni dicono che il danno si è verificato ed è diventato visibile entro poche ore dalla somministrazione, e altri sostengono che si sia trattato di una questione di alcune settimane. Anche se non abbiamo prove indiscutibili sull'attendibilità di queste attestazioni, possiamo avanzare un'ipotesi per spiegare i diversi fenomeni. Nel primo caso, gli inquinanti contenuti nel farmaco hanno raggiunto il cervello e, a seconda della sede anatomica interessata, hanno indotto una reazione. Se questo è il caso, l'intero fenomeno è molto rapido. In quest'ultima circostanza, gli inquinanti hanno raggiunto il microbiota, interferendo così con la produzione di enzimi necessari per svolgere le funzioni neurologiche.32\u201235 Tale eventualità richiede tempo, in quanto comporta la produzione di composti chimici in quantità sufficiente, e un lasso di alcune settimane tra l'iniezione e l'evidenza clinica è ragionevole. Naturalmente, la nostra non è altro che un'ipotesi aperta alla discussione e bisognosa di prove, sperando che sia concessa la possibilità di ulteriori indagini.
Conclusione
Dalle analisi effettuate emerge che in tutti i campioni controllati i vaccini contengono corpi estranei non biocompatibili e biopersistenti non dichiarati dai Produttori, contro i quali l'organismo reagisce in ogni caso. Questa nuova indagine rappresenta un nuovo controllo di qualità che può essere adottato per valutare la sicurezza di un vaccino. La nostra ipotesi è che questa contaminazione non sia intenzionale, poiché è probabilmente dovuta a componenti o procedure inquinate di processi industriali (es. filtrazioni) utilizzati per produrre vaccini, non indagati e non rilevati dai produttori. Se la nostra ipotesi è effettivamente vera, un attento controllo dei luoghi di lavoro e la piena conoscenza dell'intera procedura di preparazione del vaccino consentirebbe probabilmente di eliminare il problema.
Un'ulteriore purificazione dei vaccini potrebbe migliorarne la qualità e potrebbe probabilmente diminuire il numero e la gravità degli effetti collaterali avversi.
Riconoscimenti
Gli Autori sono grati al Dott. Federico Capitani, alla Dott.ssa Laura Valentini e alla Sig.ra Lavinia Nitu per la loro assistenza tecnica. I pareri e le conclusioni non sono necessariamente quelli dell'istituzione.
Conflitti di interesse
L'autore dichiara di non avere conflitti di interesse.
Finanziamento
Nessuno.
Referenze
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